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水質(zhì)檢測(cè)儀

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檢測(cè)飲用水中腸球菌的方法

發(fā)布時(shí)間:2022/4/26 16:57:06 來源:貫奧儀器儀表 作者:便攜式多參數(shù)水質(zhì)分析儀器 閱讀次數(shù):

  水中的腸球菌也被稱為革蘭陽性球菌,此類菌種廣泛的分布于自然環(huán)境及人、動(dòng)物等消化道內(nèi)。因此在常見的地表水也有此類菌種的存在,目前針對(duì)腸球菌的檢測(cè)可以采用很多方法,例如常用的平板計(jì)數(shù)法、最近似值測(cè)定法以及酶底物法。而今天我們要了解的就是利用酶底物法檢測(cè)飲用水中腸球菌的具體步驟。

  其原理是腸球菌在41℃溫度條件下培養(yǎng)24h,能夠產(chǎn)生β-D-葡糖苷酶,將選擇性培養(yǎng)基中熒光底物4-甲基傘形酮β-D-葡糖苷(4-MUG)分解,分解后的熒光底物在366nm紫外光下產(chǎn)生熒光,統(tǒng)計(jì)陽性反應(yīng)數(shù)量,通過查詢MPN表,計(jì)算樣品中的腸球菌濃度。

飲用水水樣采集

檢測(cè)試劑及材料

1.市售Enterolert 培養(yǎng)基,也可以使用其他等效產(chǎn)品。

2. 生理鹽水:氯化鈉濃度為0.85%。

3.標(biāo)準(zhǔn)菌株:糞腸球菌有證標(biāo)準(zhǔn)菌株,大廠埃希氏菌有證標(biāo)準(zhǔn)菌株。

4.無菌水:實(shí)驗(yàn)室一級(jí)純水,經(jīng)121℃高壓蒸氣滅菌20min。

5.硫代硫酸鈉:純度≥98%。

6.硫代硫酸鈉溶液(5.0g/L)

稱取0.5g硫代硫酸鈉,精確至0.1g,溶于適量水中,定容至100mL,121℃高壓滅菌20min。

7.磷酸鹽緩沖液:

氯化鈉                8.01g

氯化鉀                0.2g

磷酸氫二鈉            1.44g

磷酸二氫鉀            0.24g

上述成分溶解于950mL無菌水中,用鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH值到7.4后加無菌水定容至1000mL,121℃高壓滅菌20min,備用。

檢測(cè)儀器

1.采樣瓶:具螺旋蓋或磨口塞的100mL、500mL玻璃瓶。

2.恒溫培養(yǎng)箱:允許溫度偏差41℃±1℃。

3.高壓蒸汽滅菌器:121℃可調(diào)。

4.程控定量封口機(jī):用于定量盤的封口。

5.紫外燈及配套燈箱:366nm。

6.定量盤:51孔或97孔。

7.天平:精確至0.001g。

8.容量瓶:10mL和100mL。

檢測(cè)步驟

首先是定性分析

  用滅菌處理過的100mL采樣瓶量取100mL水樣,加入一包培養(yǎng)基,混搖均勻使之完全溶解,放入恒溫培養(yǎng)箱中41℃±1℃培養(yǎng)24h。

其次是定量分析

  用滅菌處理過的100mL采樣瓶量取100mL水樣,加入一包培養(yǎng)基,混搖均勻使之完全溶解。

  將上述100mL水樣全部倒入51孔無菌定量盤內(nèi),撫平定量盤背面以趕除孔穴內(nèi)氣泡,然后用程控定量封口機(jī)封口,放入恒溫培養(yǎng)箱中41℃±1℃培養(yǎng)24h。

  空白對(duì)照可以用無菌水按照檢測(cè)步驟進(jìn)行操作。

定性結(jié)果

  定性分析的水樣,在紫外燈下觀察,產(chǎn)生熒光,則判定為陽性反應(yīng);不產(chǎn)生熒光則判定為陰性反應(yīng)。

定量結(jié)果

  在紫外燈下觀察培養(yǎng)24h定量盤,計(jì)數(shù)有熒光反應(yīng)的孔數(shù),參照可信范圍表計(jì)數(shù)定量,結(jié)果以MPN/100mL表示。如所有孔穴均未產(chǎn)生熒光,則報(bào)告腸球菌“未檢出”。若熒光不明顯,可以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至28h進(jìn)行結(jié)果判讀,超過28h后出現(xiàn)的顏色反應(yīng),不作為陽性結(jié)果。

水質(zhì)腸球菌檢測(cè)可信范圍表

腸球菌51孔定量盤法不同陽性結(jié)果表

此內(nèi)容來源于《DB37/T 4153—2020 水質(zhì)腸球菌的測(cè)定酶底物法》